Partículas Lentivirales de Activación (h) FHR-1: sc-416510-LAC

CFHR1 codifica la proteína 1 relacionada con el factor H del complemento (FHR-1), un regulador secretado de la vía alternativa del complemento que se une a C3b/C3d y modula la actividad de la convertasa de C3 en superficies del hospedador y microbianas. Al moldear la amplificación del complemento, FHR-1 influye en la opsonización, la señalización inflamatoria y la eliminación de complejos inmunitarios, conectando con la vigilancia inmunitaria innata y la homeostasis endotelial. La variación genética o la expresión alterada de CFHR1 se han vinculado con una actividad del complemento desregulada relevante para la patología renal y vascular, incluido el síndrome urémico hemolítico atípico y la degeneración macular asociada a la edad, así como con la autoinmunidad impulsada por el complemento. La manipulación experimental de CFHR1 permite estudios mecanísticos de la regulación del complemento, las redes de proteínas séricas y el depósito de complemento en la superficie celular en condiciones inflamatorias.

Las partículas de activación lentiviral FHR-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CFHR1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FHR-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CFHR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FHR-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CFHR1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.