FHR-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416510-ACT

CFHR1 codifica a proteína 1 relacionada ao fator H do complemento (FHR-1), um regulador solúvel da via alternativa do complemento que modula a atividade da convertase de C3 e molda a amplificação da ativação do complemento em superfícies do hospedeiro e microbianas. Ao competir com o fator H do complemento e interagir com componentes do complemento, a FHR-1 influencia a opsonização, a sinalização inflamatória e o manejo de complexos imunes, conectando a vigilância imune inata à homeostase tecidual. Variações genéticas ou expressão alterada de CFHR1 estão associadas a fenótipos de desregulação do complemento e têm sido estudadas em contextos como a síndrome hemolítico-urêmica atípica, a glomerulopatia por C3, a degeneração macular relacionada à idade e outras patologias renais e oculares impulsionadas por inflamação. Como resultado, CFHR1 é amplamente utilizado em estudos mecanísticos de controle do complemento, regulação imune extracelular e vias de lesão a jusante.

FHR-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CFHR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FHR-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CFHR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CFHR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FHR-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CFHR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FHR-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FHR-1 em células tumorais com expressão de CFHR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.