Plásmido Doble Nickase (h) FHOD1: sc-404286-NIC

FHOD1 (formin homology 2 domain containing 1) codifica una formina relacionada con Diaphanous que promueve la elongación y la organización de los filamentos de actina, favoreciendo el ensamblaje de fibras de estrés, la polaridad celular y la migración dependiente de la adhesión. Como efector aguas abajo de la señalización de las GTPasas de la familia Rho, FHOD1 integra señales procedentes de vías de remodelación del citoesqueleto para regular la contractilidad y la dinámica de las protrusiones de membrana. La actividad alterada de FHOD1 se ha asociado con cambios en la motilidad celular y el comportamiento invasivo, y la desregulación de la arquitectura de actina implica a FHOD1 en estudios sobre la progresión tumoral, la remodelación cardiovascular y fibrótica, y procesos del neurodesarrollo. Su localización y función en estructuras ricas en actina lo convierten en un nodo útil para analizar la mecanotransducción y el acoplamiento citoesqueleto–núcleo.

FHOD1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FHOD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FHOD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FHOD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FHOD1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.