FHL-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402930-ACT

O FHL2 humano codifica a FHL-2, uma proteína adaptadora contendo domínios LIM que atua como correagulador transcricional e como plataforma (“scaffold”) que conecta sinais de sinalização a programas de expressão gênica. A FHL-2 interage com vias que controlam a organização do citoesqueleto, a adesão celular e a mecanotransdução, e pode modular, de maneira dependente do contexto, as respostas transcricionais a jusante das vias Wnt/β-catenina, TGF-β/SMAD e MAPK. Por meio de interações com receptores nucleares e outros fatores de transcrição, a FHL-2 contribui para a regulação da proliferação, diferenciação e do remodelamento responsivo ao estresse. A expressão desregulada de FHL2 e o acoplamento alterado a essas vias foram relatados em diversos contextos relevantes para doenças, incluindo biologia tumoral, processos relacionados à fibrose e remodelamento cardiovascular, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos.

FHL-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FHL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FHL-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FHL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FHL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FHL-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FHL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FHL-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FHL-2 em células tumorais com expressão de FHL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.