Plasmide CRISPR d'Activation (h) FHL-2: sc-402930-ACT

Le gène humain **FHL2** code **FHL-2**, une protéine adaptatrice contenant des domaines LIM, qui agit comme co‑régulateur transcriptionnel et échafaudage reliant les signaux de signalisation aux programmes d’expression génique. FHL-2 s’interface avec des voies contrôlant l’organisation du cytosquelette, l’adhésion cellulaire et la mécanotransduction, et peut moduler, de manière dépendante du contexte, les sorties transcriptionnelles en aval des voies Wnt/β‑caténine, TGF‑β/SMAD et MAPK. Par ses interactions avec des récepteurs nucléaires et d’autres facteurs de transcription, FHL-2 contribue à la régulation de la prolifération, de la différenciation et du remodelage en réponse au stress. Une expression dérégulée de FHL2 et une altération du couplage entre voies ont été rapportées dans de multiples contextes pertinents pour la maladie, notamment en biologie tumorale, dans les processus liés à la fibrose et dans le remodelage cardiovasculaire, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques.

FHL-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FHL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FHL-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FHL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FHL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FHL-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FHL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FHL-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FHL-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FHL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.