FHL-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403541

Visão geral

FHL1 codifica a proteína com quatro e meio domínios LIM 1 (FHL-1), uma proteína adaptadora composta apenas por domínios LIM, enriquecida em músculo estriado, que atua como plataforma de montagem (“scaffold”) de complexos multiproteicos no sarcômero e no costâmero. A FHL-1 coordena a organização do citoesqueleto, a mecanotransdução e as respostas transcricionais ao acoplar proteínas estruturais a nós de sinalização implicados na diferenciação e no remodelamento muscular. Alterações na função de FHL1 estão associadas a miopatias e cardiomiopatias hereditárias, nas quais interações proteína–proteína desreguladas podem comprometer a integridade sarcomérica e vias de resposta ao estresse. Além da biologia muscular, a FHL-1 tem sido usada como modelo para estudar a montagem de complexos de sinalização mediada por domínios LIM e a regulação dependente do contexto da expressão gênica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FHL-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FHL1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FHL1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FHL1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FHL-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FHL1 para a investigação da sinalização de FHL-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FHL1 críticos para a função FHL-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FHL1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo FHL-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo FHL-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FHL1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo FHL-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR FHL-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FHL1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FHL1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.