FGF-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403042-ACT

FGF4 codifica o fator de crescimento de fibroblastos 4 (FGF-4), um ligante mitogênico secretado que sinaliza principalmente por meio de tirosina-quinases FGFR para regular o padrão embrionário, a indução do mesoderma e o crescimento tecidual. A ligação do FGF-4 ativa as cascatas canônicas MAPK/ERK e PI3K/AKT e pode influenciar a progressão do ciclo celular, a sobrevivência e programas de diferenciação de maneira dependente do contexto. A desregulação da sinalização FGF4/FGFR tem sido implicada em fenótipos proliferativos e de desenvolvimento aberrantes e é estudada em modelos de ativação de vias oncogênicas e de alteração da especificação de linhagens. Em células humanas, o FGF-4 oferece um ponto de entrada tratável para dissecar respostas transcricionais induzidas por fatores de crescimento, crosstalk entre receptores e a dinâmica de vias de quinases a jusante.

FGF-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGF4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGF4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGF4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGF4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-4 em células tumorais com expressão de FGF4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.