FGF-23 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425719-ACT

O gene murino **Fgf23** codifica o **FGF-23**, um fator de crescimento de fibroblastos endócrino produzido principalmente por osteócitos e osteoblastos, que coordena a homeostase sistêmica do fosfato e da vitamina D. Atuando por meio de complexos **FGFR–Klotho**, o FGF-23 suprime a reabsorção renal de fosfato e modula enzimas do metabolismo da vitamina D, conectando sinais derivados do osso à função renal. Esse eixo se integra a vias do metabolismo mineral, incluindo a sinalização de **PTH** e as cascatas **MAPK** mediadas por receptores de FGF, para manter o equilíbrio de fosfato e a mineralização do esqueleto. A atividade desregulada de FGF-23 está associada a alterações no manejo de fosfato e a fenótipos metabólicos osso–rim, tornando **Fgf23** um ponto útil para estudar o metabolismo mineral e a comunicação endócrina em modelos murinos.

FGF-23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fgf23 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fgf23 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fgf23, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-23. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fgf23 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-23 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-23 em células tumorais com expressão de Fgf23 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.