FGF-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400324-ACT

ヒトのFGF2遺伝子は、ヘパリン結合性のマイトジェンである線維芽細胞増殖因子2（FGF-2）をコードしており、間葉系および神経系系譜にわたって、細胞の増殖・生存・遊走・分化を制御します。FGF-2は主としてFGFRチロシンキナーゼを介してシグナルを伝達し、MAPK/ERK、PI3K/AKT、PLCγ、STAT関連のプログラムを活性化することで、血管新生、組織リモデリング、細胞外マトリックス動態を協調的に制御します。FGF2の発現やFGFR経路活性の破綻は、異常な血管新生、線維化、腫瘍性シグナルネットワークに関与するとされ、腫瘍—間質相互作用や神経炎症などの文脈で頻繁に研究されています。多面的（プレイオトロピック）な増殖因子としてのFGF-2は、複雑な培養系における受容体クロストーク、転写状態の変化、パラクリンシグナルを検討するための扱いやすい軸を提供します。

FGF-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FGF2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FGF-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FGF2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFGF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FGF-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFGF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFGF-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFGF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFGF-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。