FGF-13 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420327-ACT

O gene murino **Fgf13** codifica o fator de crescimento de fibroblastos 13 (FGF-13), um membro intracelular da família FGF que atua predominantemente fora da sinalização canônica de FGF/FGFR mediada por fatores secretados. O FGF-13 associa-se aos microtúbulos e modula a dinâmica do citoesqueleto, o crescimento de neuritos e a polarização neuronal, além de ter sido associado à regulação da atividade de canais de sódio dependentes de voltagem, que molda a excitabilidade no sistema nervoso. Por meio dessas funções, o FGF-13 se conecta a vias que governam o desenvolvimento axonal, a função sináptica e a maturação neuronal dependente de atividade. A desregulação da expressão ou da função do FGF-13 tem sido implicada em fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, sustentando seu uso em estudos de formação de circuitos e de mecanismos de doença relacionados à excitabilidade.

FGF-13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fgf13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fgf13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fgf13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-13. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fgf13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-13 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-13 em células tumorais com expressão de Fgf13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.