Plásmido Doble Nickase (h) Fes: sc-403246-NIC

FES codifica Fes, una tirosina cinasa no receptora que integra señales de receptores de citocinas y de factores de crecimiento para regular programas dependientes de la fosforilación que controlan la adhesión, la migración y la diferenciación celulares. Fes participa en vías vinculadas a la remodelación del citoesqueleto y a la dinámica vesicular/actina, influyendo en el comportamiento de células mieloides y endoteliales y en las respuestas celulares a señales inflamatorias. La desregulación de la señalización de tirosina cinasas que involucra a Fes se ha asociado con alteraciones en señales de proliferación y supervivencia en linajes hematopoyéticos y en otros contextos, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la transducción de señales. En investigación en biología del cáncer e inmunología, FES se analiza con frecuencia por su impacto en redes impulsadas por cinasas que modulan la plasticidad celular y las interacciones con el microambiente.

Fes El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FES en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FES. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FES. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FES alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.