FEN-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403168-NIC

O FEN1 humano codifica a endonuclease de flap 1 (FEN-1), uma nuclease específica de estrutura que cliva intermediários de “flap” 5′ gerados durante a maturação dos fragmentos de Okazaki e o reparo por excisão de base de via longa (long-patch). A FEN-1 coordena-se com a PCNA, polimerases de DNA e a ligase I para manter a integridade da forquilha de replicação e a estabilidade do genoma, além de contribuir para o processamento de estruturas secundárias de DNA que surgem durante o estresse replicativo. A interrupção da função de FEN1 está associada ao aumento da sinalização de dano ao DNA, mutagênese e instabilidade cromossômica, processos frequentemente investigados na biologia do câncer e em distúrbios hereditários de manutenção do genoma. Como resultado, a FEN-1 é amplamente utilizada como um nó modelo para estudar a escolha de vias de reparo do DNA, o reparo associado à replicação e as respostas a agentes genotóxicos.

FEN-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FEN1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FEN1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FEN1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FEN1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.