Plasmide CRISPR d'Activation (h) FCRLM1: sc-417336-ACT

FCRLA code le récepteur de type Fc receptor–like A, une protéine intracellulaire de la famille des FcR, exprimée principalement dans les cellules de la lignée B et associée au réticulum endoplasmique ainsi qu’à des compartiments contenant des immunoglobulines. Il est impliqué dans la différenciation des cellules B et l’homéostasie immunitaire en influençant l’assemblage/le trafic des immunoglobulines et des réseaux de signalisation qui façonnent les réponses dépendantes de l’antigène. Des profils d’expression altérés des gènes de type Fc receptor–like, dont FCRLA, ont été rapportés dans divers cancers des cellules B et dans des états immunitaires associés à l’auto-immunité, ce qui étaye son intérêt comme marqueur et comme nœud mécanistique de la biologie des cellules B. L’étude de la régulation de FCRLA aide à définir les voies qui contrôlent l’activation des cellules B, la production d’anticorps et les réponses au stress liées à une immunité humorale dérégulée.

FCRLM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FCRLA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FCRLM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FCRLA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FCRLA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FCRLM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FCRLA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FCRLM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FCRLM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FCRLA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.