FCRLM1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417336-ACT

FCRLA は Fc receptor–like A（Fc受容体様A）をコードしており、主にB系譜細胞で発現する細胞内FcRファミリータンパク質である。小胞体および免疫グロブリン含有コンパートメントに局在し、免疫グロブリンのアセンブリ／輸送や、抗原依存的応答を規定するシグナル伝達ネットワークに影響を与えることで、B細胞分化と免疫恒常性に関与すると考えられている。FCRLA を含む Fc受容体様遺伝子群の発現パターンの変化は、B細胞性悪性腫瘍や自己免疫関連の免疫状態にわたって報告されており、B細胞生物学におけるマーカーおよび機構的ハブとしての有用性を支持している。FCRLA の制御機構を研究することは、B細胞活性化、抗体産生、ならびに液性免疫の破綻に関連するストレス応答を制御する経路の解明に役立つ。

FCRLM1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FCRLAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FCRLM1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FCRLA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFCRLA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FCRLM1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFCRLA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFCRLM1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFCRLA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFCRLM1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。