FcRH5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413461-ACT

FCRL5（FcRH5）は、Fc受容体様（Fc receptor–like）ファミリーに属するB細胞特異的な免疫調節受容体であり、B細胞の活性化および分化の過程でシグナル伝達の閾値を調整します。細胞質内の免疫受容体チロシン基盤モチーフ（ITIM/ITAM様モチーフなど）を介して、FcRH5はB細胞受容体（BCR）シグナル伝達、サイトカイン応答性、免疫恒常性に関連するリン酸化依存的経路に影響を与えます。その発現は成熟B細胞サブセット全体で高く、二次リンパ組織におけるB細胞の状態遷移を示すマーカーとして評価されることが一般的です。FCRL5の発現異常は、慢性的な免疫刺激環境やB細胞由来の悪性腫瘍におけるB細胞機能の変化と関連付けられており、B細胞生物学や腫瘍免疫学の機序解明研究における指標としての有用性が示唆されています。

FcRH5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FCRL5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FcRH5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FCRL5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFCRL5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FcRH5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFCRL5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFcRH5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFCRL5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFcRH5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。