FBP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401293-ACT

ヒトFUBP1は、遠位上流エレメント結合タンパク質1（FBP1）をコードしており、FBP1は一本鎖核酸に結合する制御因子として、プロモーター関連エレメントやRNA標的との相互作用を介して転写および転写後のプログラムを調節します。FBP1はMYC発現に影響を与えることでよく知られ、細胞周期の進行、増殖、ストレス適応応答を制御するより広範な遺伝子ネットワークにも関与します。これらの働きを通じて、FUBP1はクロマチン関連の転写制御やRNA代謝を担う経路と結びつき、状況依存的な遺伝子発現を研究するうえで重要な結節点となります。FUBP1の活性や発現量（ドシージ）の変化は、がんおよび神経発達に関連する複数の状況で報告されており、がん化シグナル伝達、分化、ゲノム安定性の機構モデルにおいて有用であることが示唆されています。

FBP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FUBP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FBP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FUBP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFUBP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FBP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFUBP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFBP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFUBP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFBP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。