FBL4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-435345

概要

Fbxl4 は、SCF（SKP1–CUL1–F-box）型E3ユビキチンリガーゼ複合体において基質認識を担う構成要素として機能する、F-boxおよびロイシンリッチリピート（LRR）タンパク質をコードし、特定のタンパク質をユビキチン依存的な分解へと導くのを助ける。制御されたプロテオスタシスを通じて、FBXL4 は細胞周期の進行、ストレス応答、さらにはユビキチン–プロテアソーム系全体のダイナミクスに影響し得る。マウスでは、FBXL4 活性の変化がミトコンドリア恒常性や細胞のエネルギー代謝と関連づけられており、ミトコンドリア機能障害およびそれに伴う多系統性の疾患表現型の研究における重要性を支持している。したがって Fbxl4 は、ユビキチン介在性の品質管理が代謝経路やオルガネラ維持とどのように連携しているかを解明するうえで有用な標的である。

FBL4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFbxl4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fbxl4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fbxl4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FBL4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FBL4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fbxl4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FBL4の機能に不可欠なFbxl4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fbxl4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FBL4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFBL4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fbxl4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FBL4 HDRプラスミド（m）および FBL4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFbxl4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFbxl4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。