FAM55D Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412343

Descripción general

NXPE4 codifica la proteína humana FAM55D, miembro de la familia de proteínas con dominio neurexofilina y PC-esterasa, que se predice que es secretada o asociada a membrana y está enriquecida en contextos neuronales. Aunque su función molecular aún no está completamente caracterizada, las características de la familia sugieren posibles funciones en interacciones proteicas extracelulares y en procesos de comunicación célula–célula que pueden influir en la conectividad neuronal y la organización sináptica. La variación a nivel de transcritos y los patrones de expresión específicos por tejido se han explorado en conjuntos de datos genómicos, lo que respalda seguir investigando NXPE4 en neurobiología y en las redes reguladoras que modelan el desarrollo y la función del cerebro. Se ha informado de una expresión alterada de NXPE4 en estudios de asociación en cohortes relevantes para enfermedades, lo que impulsa estudios mecanísticos para definir cómo la perturbación afecta a los fenotipos celulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FAM55D (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NXPE4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NXPE4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NXPE4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FAM55D.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NXPE4 para la investigación de la señalización de FAM55D, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NXPE4 críticos para la función de FAM55D
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NXPE4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FAM55D CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FAM55D CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NXPE4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FAM55D (h) y el plásmido HDR FAM55D (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NXPE4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NXPE4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.