FAK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400089-ACT

プロテインチロシンキナーゼ2（PTK2）は、フォーカルアドヒージョンキナーゼ（FAK）をコードする受容体型ではないチロシンキナーゼであり、フォーカルアドヒージョンにおいてインテグリンと増殖因子受容体のシグナル伝達を統合・調整し、細胞接着、遊走、生存、メカノトランスダクションを制御する。FAKは、PI3K/AKT、MAPK/ERK、Rho GTPaseシグナル、フォーカルアドヒージョンのターンオーバーなどの経路を介して、細胞外マトリックスとの結合からの情報を細胞骨格リモデリングと結び付ける。上皮間葉転換、浸潤、足場依存的シグナル伝達における役割を通じて、PTK2/FAK活性の変化は腫瘍進展や転移の生物学に加え、線維化や炎症性の組織リモデリングといった文脈でも頻繁に研究されている。接着依存性シグナル伝達における中心的な位置づけから、PTK2は細胞運動性や微小環境によって駆動される表現型を解析するための代表的なノードとして広く用いられている。

FAK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PTK2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FAK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PTK2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPTK2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FAKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPTK2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFAK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPTK2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFAK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。