EYA4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404355

概要

EYA4は、転写共役因子およびホスファターゼとして機能するEyes Absent（EYA）ファミリーの一員をコードしており、発生過程およびストレス応答性のシグナル伝達プログラムを統合します。SIXやDACHタンパク質との相互作用を介して、EYA4は細胞運命決定、分化、ならびに組織特異的形態形成を制御する遺伝子制御ネットワークに寄与します。本タンパク質のチロシンホスファターゼ活性は、DNA損傷応答の調節や、細胞恒常性を形作るその他のリン酸化依存的プロセスの制御に関与することが示されています。EYA4の発現異常やゲノム破綻は、感覚器および心臓の表現型と関連し、腫瘍に伴うエピジェネティックなサイレンシングに関する研究でも報告されていることから、ヒト疾患モデルにおける機序解明研究において重要であることが示唆されます。

EYA4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEYA4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EYA4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EYA4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EYA4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EYA4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EYA4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EYA4の機能に不可欠なEYA4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EYA4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EYA4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEYA4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EYA4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EYA4 HDRプラスミド（h）および EYA4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEYA4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEYA4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。