EYA4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404355-ACT

EYA4は、転写共役因子およびホスファターゼとして機能するEyes Absent（EYA）ファミリーの一員をコードし、発生過程の転写プログラムと、シグナル応答性の細胞運命制御とを統合します。EYA4は、分化、器官形成、感覚系の維持に影響する遺伝子制御ネットワークに関与し、核内の転写出力を制御する経路やストレス応答シグナル伝達とも連動し得ます。ヒトでは、EYA4の活性や発現の変化が聴覚機能や心筋症に関わる表現型と関連づけられており、組織恒常性およびその破綻の機構を研究する上で重要な標的となっています。研究者は一般に、転写補助因子としての機能とホスファターゼ活性が、系譜特異的な遺伝子発現と細胞の適応をどのように協調して制御するかを理解する目的でEYA4を解析します。

EYA4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EYA4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EYA4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EYA4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEYA4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EYA4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEYA4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEYA4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEYA4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEYA4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。