EYA1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404056-ACT

ヒトEYA1（eyes absent homolog 1）は、転写共役因子であると同時に、ハロ酸デハロゲナーゼ（HAD）ファミリーに属するホスファターゼをコードしており、発生シグナル伝達を遺伝子制御プログラムと統合する。EYA1はSIXおよびDACHタンパク質と協調して器官形成や細胞運命決定を制御し、さらにリン酸化依存的シグナルの調節を介してDNA損傷応答にも関与する。EYA1活性または発現の異常は、耳および腎臓の形態形成に影響する先天性発達障害と関連しており、分化・増殖プログラムの変化が疾患表現型に寄与する状況において研究されてきた。核—細胞質シャトル型の調節因子として、EYA1は転写制御、ホスファターゼ生物学、ならびに発生経路間クロストークを研究するための扱いやすい結節点を提供する。

EYA1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EYA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EYA1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EYA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEYA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EYA1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEYA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEYA1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEYA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEYA1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。