EXOSC8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405322-ACT

EXOSC8は、ヒトRNAエキソソーム複合体の中核サブユニットをコードしています。RNAエキソソームは、核および細胞質においてRNAの品質管理と分解（ターンオーバー）を担う、多タンパク質性の3′–5′エキソリボヌクレアーゼです。EXOSC8は、rRNA、snRNA、snoRNA、ならびにmRNA分解中間体の協調的なプロセシングと分解を通じて、トランスクリプトームの完全性とプロテオスタシスを維持するRNA監視経路に寄与します。エキソソーム機能が破綻すると、リボソーム生合成、転写恒常性、ストレス応答が乱れ、EXOSC8の異常は、エキソソーム関連遺伝子で報告されている神経発達性および神経変性の表現型と関連づけられます。そのためEXOSC8は、ヒト細胞におけるRNA代謝、転写共役的プロセシング、ならびにRNA分解機構を研究するうえで有用な標的です。

EXOSC8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EXOSC8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EXOSC8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EXOSC8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEXOSC8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EXOSC8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEXOSC8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEXOSC8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEXOSC8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEXOSC8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。