Exo1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-424133-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Exo1O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Exo1 (m) e o Plasmídeo Double Nickase Exo1 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Exo1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Exo1 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-424133-NIC | 20 µg | $410.00 |
A exonuclease 1 (Exo1) é uma nuclease 5′→3′ específica de estrutura que atua na ressecção das extremidades do DNA durante a recombinação homóloga e no reparo de incompatibilidades do DNA (mismatch repair) do tipo long-patch. Em células de camundongo, a Exo1 colabora com MSH2–MSH6/MLH1–PMS2 e com fatores associados a MRN/BLM para processar intermediários de DNA gerados durante a replicação, a recombinação e o reinício de forquilhas de replicação estagnadas, contribuindo assim para a estabilidade do genoma. A atividade da Exo1 influencia a sinalização de checkpoints e a escolha da via de reparo após quebras de dupla fita e estresse replicativo. A desregulação do reparo dependente de EXO1 tem sido associada a um aumento da carga mutacional e à instabilidade cromossômica, o que a torna relevante para o estudo de mecanismos subjacentes à suscetibilidade ao câncer e a outros distúrbios de manutenção do genoma.
Exo1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Exo1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Exo1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Exo1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Exo1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.