Evx-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420249

概要

Evx1 は、ホメオボックス型転写因子 Evx-1 をコードしており、胚のパターン形成を担い、前後軸（anterior–posterior axis）に沿った細胞運命決定の指定を助ける発生制御因子です。マウスでは、Evx-1 は形態形成を協調させる転写ネットワークに関与しており、神経管のパターン形成、後脳／脊髄の領域化、体節（somite）の発生に関連する遺伝子プログラムなどに結び付いています。配列特異的な DNA 結合タンパク質として、Evx-1 は系譜（ライン）に制限された転写状態を制御することで、下流のシグナル伝達や分化経路に影響を与えます。EVX1 のプログラム変化を含むホメオボックス遺伝子活性の異常は、発生モデルにおける先天奇形や異常な分化表現型への影響という観点から研究されています。

Evx-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEvx1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Evx1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Evx1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Evx-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Evx-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Evx1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Evx-1の機能に不可欠なEvx1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Evx1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Evx-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEvx-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Evx1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Evx-1 HDRプラスミド（m）および Evx-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEvx1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEvx1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。