Estrogen Receptor beta Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-420232-NIC

O gene Esr2 do camundongo codifica o receptor de estrogênio beta (ERβ), um receptor nuclear ativado por ligante que atua como fator de transcrição, regulando genes envolvidos na biologia reprodutiva, na sinalização neural, na modulação imune e na homeostase tecidual. Após a ligação do estrogênio, o ERβ interage com elementos de resposta ao estrogênio e com complexos de correaguladores para moldar o estado da cromatina e a transcrição dentro de redes de sinalização de hormônios esteroides, com ampla comunicação cruzada com as vias MAPK/ERK e PI3K/AKT. A atividade do ERβ influencia o controle do ciclo celular, programas de diferenciação, a função mitocondrial e a expressão de genes inflamatórios de maneira dependente do contexto. A sinalização desregulada de Esr2 tem sido associada a fenótipos de fertilidade alterados, mudanças neurocomportamentais e fisiopatologia hormônio-responsiva relevante para distúrbios metabólicos e inflamatórios em modelos murinos.

Estrogen Receptor beta O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Esr2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Esr2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Esr2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Esr2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.