Plásmido Doble Nickase (m) Estrogen Receptor beta: sc-420232-NIC

El gen Esr2 del ratón codifica el receptor de estrógeno beta (ERβ), un receptor nuclear activado por ligando que actúa como factor de transcripción regulando genes implicados en la biología reproductiva, la señalización neuronal, la modulación inmunitaria y la homeostasis tisular. Tras unirse el estrógeno, ERβ interactúa con elementos de respuesta a estrógenos y complejos correreguladores para modular el estado de la cromatina y la transcripción dentro de las redes de señalización de hormonas esteroideas, con una amplia interacción cruzada con las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT. La actividad de ERβ influye en el control del ciclo celular, los programas de diferenciación, la función mitocondrial y la expresión de genes inflamatorios de manera dependiente del contexto. La desregulación de la señalización de Esr2 se ha vinculado a fenotipos de fertilidad alterados, cambios neuroconductuales y fisiopatología sensible a hormonas relevante para trastornos metabólicos e inflamatorios en modelos murinos.

Estrogen Receptor beta El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Esr2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Esr2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Esr2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Esr2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.