ERp57 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420698

Visão geral

Pdia3 codifica a ERp57 (também conhecida como PDIA3/GRP58), uma oxidorredutase tiol–dissulfeto do retículo endoplasmático que atua em parceria com a calnexina e a calreticulina para promover o dobramento oxidativo e o controle de qualidade de glicoproteínas recém-sintetizadas. A ERp57 sustenta a proteostase do RE por meio da formação de ligações dissulfeto e está intimamente ligada à sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR), à degradação associada ao RE (ERAD) e à homeostase redox. Para além do lúmen do RE, a PDIA3 tem sido implicada na apresentação de antígenos via carregamento de peptídeos no MHC de classe I e na modulação de vias de sinalização relacionadas à adaptação celular ao estresse. A desregulação da atividade de PDIA3/ERp57 está associada a condições caracterizadas por estresse proteotóxico e oxidativo, incluindo modelos de doenças neurodegenerativas e metabólicas, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de estresse do RE e de processos relacionados à imunidade.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ERp57 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pdia3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pdia3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pdia3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ERp57.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pdia3 para a investigação da sinalização de ERp57, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pdia3 críticos para a função ERp57
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pdia3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ERp57 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo ERp57 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pdia3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ERp57 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR ERp57 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pdia3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pdia3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.