ERK 2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400043-ACT

MAPK1は細胞外シグナル調節キナーゼ2（ERK2）をコードしており、RAS–RAF–MEK–ERKからなるMAPKカスケードの中核的なエフェクターとして働くセリン／スレオニンキナーゼである。ERK2は増殖因子やサイトカインからの入力を統合し、細胞質および核内基質のリン酸化を介して、増殖・分化・生存・ストレス応答を制御する転写プログラムを調節する。この経路は細胞周期の進行や上流シグナルのフィードバック制御も協調的に担い、シグナルの強度と持続時間を形作る。ERKシグナルの破綻は、がん化や発生・炎症過程の異常に広く関与していることから、MAPK1/ERK2はシグナル動態や経路間クロストークの機序解明における重要な結節点となっている。

ERK 2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAPK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ERK 2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAPK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAPK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ERK 2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAPK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるERK 2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAPK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるERK 2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。