Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ERCC1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400630-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ERCC1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ERCC1ダブルニカースプラスミド（h）およびERCC1ダブルニカースプラスミド（h2）は、ERCC1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ERCC1 抗体 (D-10): sc-17809
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ERCC1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400630-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERCC1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400630-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERCC1は構造特異的エンドヌクレアーゼをコードしており、XPF（ERCC4）とヘテロ二量体を形成して、ヌクレオチド除去修復における5′側の切断を担うほか、DNA鎖間架橋や停滞した複製中間体の処理にも関与します。この複合体は、らせん構造を歪める損傷を解決し、修復と複製を協調させるゲノム維持経路で機能することで、DNA損傷や染色体異常の蓄積を抑制します。ERCC1の活性は、UV誘発性の光生成物やさまざまな嵩高い付加体に対する細胞応答と密接に結び付いており、その下流で細胞周期の進行やアポトーシスシグナル伝達にも影響を及ぼします。ERCC1を介した修復能の異常は、ゲノム安定性の表現型の変化と関連付けられており、DNA損傷応答ネットワークや変異プロセスの研究で頻繁に解析対象となっています。
ERCC1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ERCC1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ERCC1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ERCC1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ERCC1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。