Plásmido Doble Nickase (h) ERCC1: sc-400630-NIC

ERCC1 codifica una endonucleasa específica de estructura que forma un heterodímero con XPF (ERCC4) para realizar la incisión 5′ durante la reparación por escisión de nucleótidos y para procesar entrecruzamientos interhebra del ADN e intermediarios de replicación detenidos. Este complejo actúa en vías de mantenimiento del genoma que resuelven lesiones que distorsionan la doble hélice y coordinan la reparación con la replicación, limitando así la acumulación de daño en el ADN y de aberraciones cromosómicas. La actividad de ERCC1 está estrechamente vinculada a las respuestas celulares frente a fotoproductos inducidos por UV y a una variedad de aductos voluminosos, con efectos posteriores sobre la progresión del ciclo celular y la señalización de apoptosis. La capacidad de reparación mediada por ERCC1, cuando está desregulada, se ha asociado con fenotipos de estabilidad genómica alterados y se analiza con frecuencia en estudios de redes de respuesta al daño del ADN y de procesos mutacionales.

ERCC1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ERCC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ERCC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ERCC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ERCC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.