ErbB3/HER3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400146-ACT

ERBB3 codifica o ErbB3/HER3, um membro da família de receptores tirosina-quinase ERBB que atua predominantemente como um correceptor com atividade quinase reduzida. Após a ligação do ligante (por exemplo, neuregulinas), o ErbB3 forma heterodímeros com ERBB2/HER2 e outros receptores ERBB para iniciar a sinalização pelas vias PI3K–AKT, MAPK/ERK e por vias relacionadas de crescimento e sobrevivência. Sua cauda citoplasmática contém múltiplos sítios de ancoragem para PI3K, permitindo um forte acoplamento à sinalização a jusante apesar da atividade catalítica intrínseca limitada. A expressão ou sinalização desregulada de ERBB3 está implicada na reconfiguração de redes oncogênicas, em fenótipos associados à metástase e em mecanismos de resistência em múltiplos contextos tumorais.

ErbB3/HER3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ERBB3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ErbB3/HER3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ERBB3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ERBB3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ErbB3/HER3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ERBB3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ErbB3/HER3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ErbB3/HER3 em células tumorais com expressão de ERBB3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.