EPX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402513

Visão geral

EPX (peroxidase eosinofílica) codifica uma enzima granular contendo heme, expressa predominantemente em eosinófilos, na qual catalisa reações oxidativas dependentes de haletos e de tiocianato que contribuem para a atividade antimicrobiana e para a modulação de microambientes inflamatórios. Ao gerar oxidantes reativos, a EPX se integra a vias efetoras da imunidade inata, à sinalização redox e a mecanismos de remodelamento da matriz extracelular que influenciam o recrutamento de leucócitos e as respostas de lesão tecidual. Alterações na atividade da EPX e a degrânulação de eosinófilos têm sido associadas à inflamação eosinofílica em doenças das vias aéreas e gastrointestinais, bem como a reações de hipersensibilidade. Assim, a EPX é amplamente utilizada como uma leitura molecular da ativação de eosinófilos e como um nó funcional para estudar danos impulsionados por estresse oxidativo e a regulação imune.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EPX (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene EPX em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do EPX, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do EPX na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EPX.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de EPX para a investigação da sinalização de EPX, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) EPX críticos para a função EPX
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos EPX para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo EPX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo EPX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus EPX. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo EPX Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR EPX (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia EPX para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo EPX definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.