EPI64 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407095

概要

TBC1D10A は EPI64 をコードしており、EPI64 は Rab ファミリーの特定メンバーにおける GTP 加水分解を促進することで小胞輸送を調節する Rab GTPase 活性化タンパク質（GAP）です。EPI64 はエンドサイトーシス後のリサイクリングや膜輸送の制御を通じて、受容体のターンオーバー、細胞内区画のアイデンティティ、ならびに形質膜からエンドソームネットワークへ至るシグナル伝達に影響を与えます。これらの過程は、免疫シグナルやがん関連表現型でしばしば再配線される細胞骨格の組織化および細胞移動プログラムとも交差します。Rab を介した輸送の破綻は、増殖・浸潤・炎症応答の変化と関連づけられており、TBC1D10A はヒト細胞における膜動態の機構研究に有用な結節点となります。

EPI64 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTBC1D10A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TBC1D10A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TBC1D10Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EPI64タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EPI64シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TBC1D10A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EPI64の機能に不可欠なTBC1D10Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TBC1D10Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EPI64 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEPI64 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TBC1D10A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EPI64 HDRプラスミド（h）および EPI64 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTBC1D10Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTBC1D10A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。