EphB6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420202-ACT

O gene murino **Ephb6** codifica o **EphB6**, um membro com atividade de quinase comprometida da família de receptores tirosina-quinase **Eph**, que modula a sinalização célula–célula mediada por efrinas. O EphB6 participa de vias que controlam a adesão dependente de contato, a remodelação do citoesqueleto e a migração celular direcional, e pode influenciar a sinalização a jusante de GTPases da família Rho e de MAPK por meio do agrupamento de receptores e de interações com correceptores. Em tecidos em desenvolvimento e em tecidos adultos, o EphB6 contribui para a formação de fronteiras teciduais e para a comunicação entre células imunes, processos frequentemente implicados em alterações na organização dos tecidos e em respostas inflamatórias desreguladas. Alterações na sinalização Eph/efrina estão amplamente associadas à motilidade aberrante e a interações com o microambiente, tornando a regulação do EphB6 relevante para estudos mecanísticos em modelos de desenvolvimento, neurobiologia e biologia do câncer.

EphB6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ephb6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EphB6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ephb6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ephb6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EphB6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ephb6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EphB6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EphB6 em células tumorais com expressão de Ephb6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.