EphA7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401722-ACT

EPHA7は、隣接する細胞同士の接触依存的なシグナル伝達を仲介するエフリン受容体型チロシンキナーゼファミリーの一員であるEphA7をコードします。EphA7はEph/エフリンの双方向性シグナル伝達に関与し、細胞骨格の再編成、細胞接着、方向性移動を制御するとともに、組織パターニングや神経発生における役割が確立されています。下流の経路出力はしばしばRhoファミリーGTPaseシグナル伝達や、増殖・生存に影響するMAPK/ERKおよびPI3K/AKT関連プログラムと交差します。EPHA7の発現やシグナル伝達の変化は、複数のがん種や神経発生の文脈で報告されており、浸潤、分化、細胞間コミュニケーションの機構研究において重要な対象となっています。

EphA7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EPHA7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EphA7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EPHA7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEPHA7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EphA7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEPHA7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEphA7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEPHA7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEphA7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。