EP3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402485
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- EP3 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico EP3, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:EP3 Anticorpo (5F5): sc-57105
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
EP3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402485 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
PTGER3 codifica o recetor de prostaglandina E2 EP3, um GPCR do tipo rodopsina que se acopla a Gi/o (e, em alguns contextos, a Gq) para regular a atividade da adenilato ciclase, a sinalização por cAMP e vias de quinases a jusante. A ativação de EP3 modula processos que incluem inflamação, tónus vascular e do músculo liso, função plaquetária e regulação da barreira epitelial, por meio de um controlo dependente do contexto de segundos mensageiros e de respostas transcricionais. PTGER3 participa em redes de sinalização de eicosanoides e do ácido araquidónico que integram sinais de prostaglandinas derivados de COX com programas imunitários e metabólicos. A desregulação da sinalização de EP3 tem sido associada a fenótipos inflamatórios e cardiometabólicos e é frequentemente investigada em estudos de cancro e do microambiente, nos quais as vias das prostaglandinas moldam a proliferação, a migração e a evasão imunitária.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EP3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PTGER3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PTGER3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PTGER3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EP3.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PTGER3 para a investigação da sinalização de EP3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PTGER3 críticos para a função EP3
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PTGER3 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo EP3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo EP3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PTGER3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo EP3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR EP3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PTGER3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PTGER3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.