EP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402485

概要

PTGER3 はプロスタグランジンE2受容体 EP3 をコードする遺伝子であり、Gi/o（状況によっては Gq）に共役するロドプシン様GPCRです。これにより、アデニル酸シクラーゼ活性、cAMPシグナル、ならびに下流のキナーゼ経路が制御されます。EP3 の活性化は、セカンドメッセンジャーや転写応答を状況依存的に制御することで、炎症、血管および平滑筋の緊張、血小板機能、上皮バリア制御などの過程を調節します。PTGER3 は、COX由来のプロスタグランジン刺激を免疫・代謝プログラムと統合する、エイコサノイド／アラキドン酸シグナル伝達ネットワークに関与します。EP3 シグナルの破綻は炎症性および心代謝性の表現型と関連づけられており、プロスタグランジン経路が増殖・遊走・免疫回避を規定することから、がんおよび腫瘍微小環境の研究でも頻繁に検討されています。

EP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPTGER3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PTGER3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PTGER3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EP3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EP3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PTGER3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EP3の機能に不可欠なPTGER3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PTGER3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PTGER3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EP3 HDRプラスミド（h）および EP3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPTGER3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPTGER3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。