Eos CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402330-ACT

IKZF4（Eos）は、Ikarosファミリーに属するジンクフィンガー型転写因子であり、造血系細胞系譜において、状況依存的に遺伝子発現を調節する因子として機能します。特に、T細胞分化と免疫恒常性の維持において重要な役割を担います。Eosはクロマチンリモデリングや転写の抑制／活性化プログラムに関与し、サイトカインシグナルの出力や系譜特異的な転写ネットワークの形成を方向づけます。共調節複合体との相互作用を通じて、IKZF4は細胞運命決定、活性化閾値の設定、ならびに制御性表現型の維持を協調的に制御します。IKZF4の活性異常や発現パターンの変化は、免疫介在性の病態生理に関与することが示唆されており、炎症性シグナルや血液疾患に関連する転写状態への寄与という観点から研究されています。

Eos CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IKZF4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Eos CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IKZF4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIKZF4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Eosの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIKZF4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEos依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIKZF4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEos経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。