ENX-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403611-ACT

O EZH1 humano codifica a proteína do grupo Polycomb ENX-2, uma subunidade catalítica do PRC2 que deposita a marca histônica repressora H3K27me3 para regular a compactação da cromatina e o silenciamento gênico de longo prazo. A ENX-2 ajuda a controlar programas transcricionais específicos de linhagem durante o desenvolvimento e a diferenciação, conectando a regulação epigenética ao controle do ciclo celular e à manutenção da identidade celular. Como parte do PRC2, o EZH1 atua em conjunto com parceiros centrais como EED e SUZ12 para coordenar a repressão transcricional em loci-alvo do Polycomb. A atividade desregulada do PRC2 e paisagens alteradas de metilação de H3K27 são frequentemente estudadas na biologia do câncer, em transições de estado de células-tronco e na regulação gênica do neurodesenvolvimento, o que torna o EZH1 um nó relevante para investigar mecanismos epigenéticos.

ENX-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EZH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ENX-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EZH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EZH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ENX-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EZH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ENX-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ENX-2 em células tumorais com expressão de EZH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.