Plásmido Doble Nickase (h) ENL: sc-408751-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ENL consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ENL (h) y el plásmido de doble nickasa ENL (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MLLT1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ENL Anticuerpo (D-6): sc-393196
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ENL | sc-408751-NIC | 20 µg | $410.00 |
MLLT1 codifica el coactivador transcripcional ENL, una proteína con dominio YEATS que se une a histonas acetiladas y ayuda a acoplar el estado de la cromatina con la elongación transcripcional dependiente de la ARN polimerasa II. ENL funciona en ensamblajes relacionados con el Super Elongation Complex y coopera con reguladores epigenéticos para controlar la actividad de potenciadores (enhancers) y promotores durante programas génicos hematopoyéticos y del desarrollo. La transcripción desregulada dependiente de ENL se ha implicado en firmas de expresión génica oncogénicas, incluidas situaciones en las que MLLT1 participa en reordenamientos cromosómicos y en el reclutamiento aberrante a la cromatina. Estas propiedades hacen de MLLT1/ENL un objetivo útil para analizar mecanismos de lectura de cromatina, la liberación de la pausa transcripcional y redes reguladoras específicas de linaje en células humanas.
ENL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MLLT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MLLT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MLLT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MLLT1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.