ENL Plasmide Double Nickase (h): sc-408751-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ENL Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ENL Double Nickase Plasmid (h) e il ENL Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MLLT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ENL Antibody (D-6): sc-393196
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ENL Plasmide Double Nickase (h) | sc-408751-NIC | 20 µg | $410.00 |
MLLT1 codifica il coattivatore trascrizionale ENL, una proteina con dominio YEATS che si lega agli istoni acetilati e contribuisce a collegare lo stato della cromatina all’allungamento trascrizionale dipendente dalla RNA polimerasi II. ENL agisce all’interno di complessi affini al Super Elongation Complex e coopera con regolatori epigenetici per controllare l’attività di enhancer e promotori durante i programmi genici ematopoietici e dello sviluppo. Una trascrizione dipendente da ENL deregolata è implicata in firme di espressione genica oncogeniche, anche in contesti in cui MLLT1 partecipa a riarrangiamenti cromosomici e a un reclutamento aberrante sulla cromatina. Queste caratteristiche rendono MLLT1/ENL un bersaglio utile per studiare i meccanismi dei “lettori” della cromatina, il rilascio della pausa trascrizionale e le reti regolatorie specifiche di linea nelle cellule umane.
ENL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MLLT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MLLT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MLLT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MLLT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.