Endophilin I CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402069-ACT

SH3GL2はEndophilin Iをコードしており、BARドメインを持つアダプタータンパク質として膜の曲率形成を担い、神経シナプスにおけるクラスリン介在性エンドサイトーシスを協調的に制御します。Endophilin Iは、ダイナミンやシナプトジャニンとの相互作用を介してホスホイノシチドシグナルを小胞の出芽および脱被覆（アンコーティング）に結び付け、シナプス小胞のリサイクリングと受容体の内在化を支えます。こうしたエンドサイトーシス輸送や細胞骨格リモデリングにおける役割を通じて、SH3GL2は神経伝達と神経細胞の恒常性の調節に寄与します。SH3GL2の発現量や機能の変化は、神経変性疾患および神経精神疾患の文脈で関連が報告されており、シナプス機能障害の機構解明において重要な対象となります。

Endophilin I CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SH3GL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Endophilin I CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SH3GL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSH3GL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Endophilin Iの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSH3GL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEndophilin I依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSH3GL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEndophilin I経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。