endobrevin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403438

概要

VAMP8は、調節性エキソサイトーシスおよびエンドサイトーシス輸送の中核をなす膜融合イベントを担う、小胞関連SNAREであるエンドブレビンをコードする。VAMP8は、相手となるシンタキシンやSNAPタンパク質とともにSNARE複合体の組み立てに関与し、小胞のドッキングと融合を駆動することで、顆粒分泌、ファゴソーム‐リソソーム融合、後期エンドソーム／リソソームへの輸送などの過程を支える。免疫系や上皮の文脈では、VAMP8依存的な小胞ダイナミクスがインフラマソーム関連分泌や粘膜バリア機能に影響し、その機能異常は炎症性の表現型や宿主‐病原体応答の変化と結び付く。エンドブレビンの撹乱は受容体リサイクリングや分解経路の再編も引き起こし得るため、シグナル減衰、抗原プロセシング、細胞ストレス応答の研究においても重要である。

endobrevin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVAMP8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VAMP8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VAMP8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、endobrevinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、endobrevinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VAMP8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• endobrevinの機能に不可欠なVAMP8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VAMP8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• endobrevin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびendobrevin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VAMP8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  endobrevin HDRプラスミド（h）および endobrevin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVAMP8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVAMP8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。