Plásmido Doble Nickase (h) EN1/Engrailed 1: sc-405900-NIC

EN1 (Engrailed 1) codifica un factor de transcripción homeobox que regula el patrón embrionario y el desarrollo neural mediante el control de programas de expresión génica implicados en la especificación del destino celular, la diferenciación y la guía axonal. En células humanas, EN1 contribuye a redes transcripcionales que se intersectan con vías de señalización del desarrollo como Wnt/β-catenina y SHH, influyendo en la identidad regional y la morfogénesis tisular. La expresión desregulada de EN1 o su control epigenético se han vinculado a programas de linaje alterados y fenotipos asociados a tumores en múltiples contextos, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la reactivación del desarrollo y las transiciones de estado celular. Por ello, EN1 se investiga con frecuencia en modelos de neurodesarrollo, mantenimiento neuronal y reconfiguración transcripcional relevante para enfermedades.

EN1/Engrailed 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.