EN1/Engrailed 1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405900-NIC

EN1（Engrailed 1）は、ホームボックス型転写因子をコードしており、細胞運命の決定、分化、軸索誘導に関与する遺伝子発現プログラムを制御することで、胚のパターニングや神経発生を調節します。ヒト細胞においてEN1は、Wnt/β-カテニンやSHHなどの発生シグナル伝達経路と交差する転写ネットワークに寄与し、領域アイデンティティや組織の形態形成に影響を与えます。EN1の発現異常やエピジェネティックな制御異常は、さまざまな状況で系譜プログラムの変化や腫瘍関連の表現型と関連づけられており、発生プログラムの再活性化や細胞状態遷移を研究する上で有用なノードとなっています。そのためEN1は、神経発生、ニューロンの維持、ならびに疾患に関連した転写ネットワークの組み換えを扱うモデルで頻繁に研究されています。

EN1/Engrailed 1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EN1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EN1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EN1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EN1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。