EMR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400698-ACT

ADGRE1 codifica a EMR1, um receptor de adesão acoplado à proteína G (GPCR) da família EGF-TM7, predominantemente associado à biologia da linhagem mieloide. A EMR1 participa de interações célula–célula e de processos de vigilância imunitária, integrando sinais extracelulares com vias de sinalização associadas a GPCR que influenciam a ativação de leucócitos, a residência tecidual e as respostas inflamatórias. O seu perfil de expressão é amplamente utilizado para estudar fenótipos associados a macrófagos e eosinófilos, incluindo a regulação de redes de citocinas e programas de ativação da imunidade inata. A sinalização mieloide desregulada e estados alterados de adesão/ativação ligados à EMR1 são relevantes para a investigação de inflamação crónica, microambientes imunitários associados a tumores e remodelação tecidual mediada pelo sistema imunitário.

EMR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADGRE1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EMR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADGRE1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADGRE1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EMR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADGRE1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EMR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EMR1 em células tumorais com expressão de ADGRE1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.