EMBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422395

概要

Prg2は、好酸球に発現する強い陽電荷をもつ顆粒タンパク質である好酸球主要塩基性タンパク質（EMBP）をコードしており、粘膜部位や炎症部位における自然免疫のエフェクター機能に寄与します。脱顆粒に伴い、EMBPは負に帯電した細胞膜や細胞外マトリックス成分に結合し、上皮バリアの完全性、細胞傷害性応答、組織リモデリングに影響を及ぼし得ます。EMBPの活性は、好酸球の活性化、白血球の動員、炎症シグナル伝達を制御する経路と交差するため、Prg2はアレルギー性炎症および気道疾患モデルにおける有用なマーカーであり、機序解明上の結節点ともなります。マウス系では、Prg2の改変により、慢性炎症表現型に関連する好酸球駆動性の免疫病理と宿主—組織相互作用の解析が可能になります。

EMBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPrg2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Prg2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Prg2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EMBPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EMBPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Prg2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EMBPの機能に不可欠なPrg2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Prg2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EMBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEMBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Prg2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EMBP HDRプラスミド（m）および EMBP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPrg2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPrg2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。