Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
EMBP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422395
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- EMBP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico EMBP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EMBP Anticuerpo (F-6): sc-365701
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
EMBP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422395 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Prg2 codifica la proteína básica mayor de los eosinófilos (EMBP), una proteína granular altamente catiónica expresada en eosinófilos que contribuye a funciones efectoras de la inmunidad innata en sitios mucosos e inflamatorios. Tras la degranulación, la EMBP puede unirse a membranas con carga negativa y a componentes de la matriz extracelular, influyendo en la integridad de la barrera epitelial, las respuestas citotóxicas y la remodelación tisular. La actividad de la EMBP se cruza con vías que regulan la activación de eosinófilos, el reclutamiento de leucocitos y la señalización inflamatoria, lo que convierte a Prg2 en un marcador útil y en un nodo mecanístico en modelos de inflamación alérgica y enfermedad de las vías respiratorias. En sistemas murinos, la alteración de Prg2 ayuda a dilucidar la inmunopatología impulsada por eosinófilos y las interacciones huésped–tejido relevantes para fenotipos inflamatorios crónicos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO EMBP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Prg2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Prg2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Prg2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EMBP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Prg2 para la investigación de la señalización de EMBP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Prg2 críticos para la función de EMBP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Prg2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido EMBP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido EMBP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Prg2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EMBP (m) y el plásmido HDR EMBP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Prg2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Prg2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.