Plásmido Doble Nickase (h) eIF4AIII: sc-402660-NIC

EIF4A3 codifica eIF4AIII, una helicasa de ARN de la familia DEAD-box que actúa como componente central del complejo de unión de exones (EJC), acoplando el empalme (splicing) del pre-ARNm con procesos posteriores como la exportación, localización y traducción del ARNm, así como la degradación mediada por codones de terminación prematuros (NMD). Al fijarse al ARN de manera dependiente de ATP, eIF4AIII ayuda a definir la arquitectura de las ribonucleoproteínas mensajeras tras el splicing e influye en la vigilancia de transcritos y en la fidelidad del proteoma. La función o expresión alterada de EIF4A3 se ha vinculado a programas desregulados de procesamiento de ARN relevantes para fenotipos del neurodesarrollo y para cambios en la expresión génica asociados al cáncer. En consecuencia, EIF4A3 se estudia con frecuencia en vías que gobiernan el metabolismo del ARN, los resultados de splicing a escala genómica y el control traduccional en respuesta al estrés.

eIF4AIII El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF4A3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF4A3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF4A3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF4A3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.