EHZF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432523

概要

Zfp521は、マウス細胞において系譜選択（ラインエージ・コミットメント）および発生関連遺伝子の発現プログラムの調整に関与するとされる、核内性の亜鉛フィンガー転写因子EHZFをコードします。EHZFは、前駆細胞の維持と分化に関わる転写ネットワークを制御し、骨形成系・造血系・神経系の運命決定を司る経路とのクロストークも報告されています。クロマチン関連補因子との状況依存的な相互作用を介して、Zfp521はエピジェネティックな状態、細胞周期の進行、ならびに特定の細胞型の成熟に影響を及ぼします。Zfp521活性の異常は、分化や増殖の表現型変化と関連することが文献で示されており、実験系における発生異常や腫瘍化（オンコジェニック・トランスフォーメーション）のモデル化において重要な要素となり得ます。

EHZF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるZfp521遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Zfp521内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Zfp521のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EHZFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EHZFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Zfp521欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EHZFの機能に不可欠なZfp521エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Zfp521ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EHZF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEHZF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Zfp521遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EHZF HDRプラスミド（m）および EHZF HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZfp521ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZfp521標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。