EGR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (r): sc-437290-ACT

EGR1 (early growth response 1) é um fator de transcrição do tipo “zinc finger” de resposta imediata (immediate-early) que conecta rapidamente sinais extracelulares a programas de expressão gênica em células de rato. É induzido a jusante das vias de sinalização MAPK/ERK, PKC e dependentes de cálcio e regula processos como proliferação, diferenciação, plasticidade sináptica, respostas angiogênicas e adaptação ao estresse, por meio de controle transcricional específico do contexto. A atividade de EGR1 integra-se a redes associadas a AP-1/NF-κB e pode remodelar a cromatina e estados transcricionais após estimulação por fatores de crescimento ou lesão. A expressão desregulada de EGR1 tem sido associada na literatura a inflamação, fibrose, remodelamento vascular e programas transcricionais relacionados a tumores, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de regulação gênica responsiva a estímulos.

EGR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EGR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EGR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EGR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EGR1 em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.