EED Double Nickaseプラスミド (h): sc-401234-NIC

EEDは、トリメチル化ヒストンH3リジン27（H3K27me3）に結合し、EZH2/EZH1のメチルトランスフェラーゼ活性をアロステリックに促進することで、抑制的なクロマチンドメインの伝播を担うポリコーム抑制複合体2（PRC2）の中核構成要素をコードしている。PRC2依存的な遺伝子サイレンシングを介して、EEDは細胞アイデンティティの維持、発生過程における転写プログラムの制御、ならびに増殖と分化の調節に寄与する。EEDの攪乱はエピジェネティック抑制を破綻させ、系譜決定やクロマチン構造を制御する経路を変化させ得る。PRC2/EED機能の異常は多様ながんや発達障害で示唆されており、EEDはエピジェネティック制御と転写抑制の研究における代表的な標的となっている。

EED ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EED 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EED内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EEDの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EEDが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。