EED CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401234-ACT

EED（embryonic ectoderm development）遺伝子は、H3K27me3に結合してEZH2/EZH1のメチルトランスフェラーゼ活性をアロステリックに促進し、可逆的ヘテロクロマチン（facultative heterochromatin）と安定した転写サイレンシングを強化するPolycomb抑制複合体2（PRC2）の中核構成要素をコードします。PRC2依存的なエピジェネティック制御を介して、EEDはクロマチン凝縮と発生制御因子の抑制を協調させることで、系譜決定、細胞周期制御、ならびに細胞アイデンティティの維持に寄与します。EED–PRC2機能の破綻は、H3K27メチル化ランドスケープの広範な変化、異常な遺伝子発現プログラム、そしてさまざまな状況における腫瘍性または発生異常の表現型と関連しています。そのため、EEDはクロマチン生物学、分化モデル、ならびにPolycombによる遺伝子抑制の経路レベル解析において頻繁に研究対象となっています。

EED CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EEDの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EED CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EED 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEED転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EEDの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEED遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEED依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEED発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEED経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。