EDG-6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404415-ACT

S1PR4（EDG-6）は、免疫系および造血系の区画で顕著な機能を担うスフィンゴシン-1-リン酸（S1P）Gタンパク質共役受容体をコードします。EDG-6は、PI3K–AKT、MAPK/ERK、RhoファミリーGTPアーゼなどの下流シグナル伝達ノードと共役し、走化性、細胞骨格リモデリング、サイトカインプログラム、細胞生存を制御します。S1P依存的な白血球トラフィッキングおよび炎症シグナルの制御を介して、S1PR4は免疫恒常性、骨髄系細胞生物学、受容体駆動性の転写応答の研究に用いられています。S1P–S1PR軸の活性異常は、炎症性病態生理や腫瘍微小環境におけるプロセスと関連付けられており、免疫調節および腫瘍化シグナル伝達ネットワークの機序解明研究を支持します。

EDG-6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性S1PR4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EDG-6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における S1PR4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はS1PR4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EDG-6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のS1PR4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEDG-6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびS1PR4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEDG-6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。