E4BP4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421874
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- E4BP4 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico E4BP4, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: E4BP4 Anticuerpo (C-6): sc-374451
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
E4BP4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421874 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Nfil3 codifica el factor de transcripción de cremallera de leucina básica E4BP4 (NFIL3), un regulador de programas de expresión génica que integran señales circadianas con la señalización inmunitaria y metabólica. En el ratón, E4BP4 moldea la diferenciación y la función efectora de células inmunitarias innatas y adaptativas, incluida la formación de células NK (natural killer) y redes transcripcionales dependientes de citocinas. Participa en vías vinculadas a JAK/STAT y a la señalización inflamatoria, y modula la supervivencia celular y las salidas transcripcionales de respuesta al estrés. La desregulación de los programas asociados a NFIL3 es relevante para estudios sobre desequilibrio inmunitario, inflamación e inmunología tumoral, donde un control transcripcional alterado puede influir en la homeostasis tisular y en los fenotipos de enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO E4BP4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nfil3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nfil3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nfil3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína E4BP4.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nfil3 para la investigación de la señalización de E4BP4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Nfil3 críticos para la función de E4BP4
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nfil3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido E4BP4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido E4BP4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nfil3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR E4BP4 (m) y el plásmido HDR E4BP4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nfil3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nfil3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.