E4BP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421874

概要

Nfil3は、塩基性ロイシンジッパー型転写因子E4BP4（NFIL3）をコードしており、概日時計からの入力を免疫・代謝シグナルと統合する遺伝子発現プログラムの調節因子です。マウスでは、E4BP4は自然免疫および獲得免疫の免疫細胞の分化とエフェクター機能を制御し、ナチュラルキラー（NK）細胞の発生やサイトカイン依存的な転写ネットワークなどに関与します。JAK/STATや炎症シグナルに関連する経路にも関与し、細胞生存やストレス応答に関わる転写出力を調節します。NFIL3に関連するプログラムの破綻は、免疫バランスの乱れ、炎症、腫瘍免疫の研究において重要であり、転写制御の変化が組織恒常性や疾患表現型に影響し得ます。

E4BP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNfil3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nfil3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nfil3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、E4BP4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、E4BP4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nfil3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• E4BP4の機能に不可欠なNfil3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nfil3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• E4BP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびE4BP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nfil3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  E4BP4 HDRプラスミド（m）および E4BP4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNfil3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNfil3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。