dystrophin Plasmide Double Nickase (h): sc-400657-NIC

DMD codifica la distrofina, una grande proteina citoscheletrica che ancora la rete di actina al complesso distrofina–glicoproteine nel sarcolemma, stabilizzando le fibre muscolari durante la contrazione. Attraverso il suo ruolo di collegamento tra il citoscheletro intracellulare e la matrice extracellulare, la distrofina contribuisce all’integrità della membrana, alla meccanotrasduzione e all’organizzazione dei costameri nel muscolo scheletrico e cardiaco. La perdita o la riduzione della distrofina interrompe queste interazioni strutturali e di segnalazione, alterando l’omeostasi del calcio, la segnalazione infiammatoria e i programmi di rigenerazione muscolare. La disfunzione di DMD è fortemente associata alle distrofie muscolari legate al cromosoma X, rendendo la distrofina un nodo centrale per lo studio dei meccanismi di degenerazione muscolare e delle relazioni genotipo–fenotipo in modelli umani.

dystrophin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DMD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DMD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DMD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DMD interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.