Dynein IC1, axonemal CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-411947

개요

DNAI1은 운동성 섬모와 편모의 박동을 구동하는 외측 다이닌 팔(outer dynein arm)에서 조립과 힘 전달에 필요한 축사(axonemal) 다이닌 구성요소인 다이닌 중간사슬 1(dynein intermediate chain 1)을 암호화합니다. ATP에 의해 구동되는 다이닌 모터 활성을 미세소관 이중소관(doublet)과 결합함으로써, 축사 다이닌 IC1은 조화로운 섬모 파형 생성과 점액섬모 청소(mucociliary clearance) 과정에 기여합니다. DNAI1의 기능은 섬모 생합성, 축사 구조의 조직화, 그리고 운동성 섬모 구조의 유지를 위한 섬모내 수송(IFT, intraflagellar transport) 의존적 유지 경로와 맞물려 있습니다. DNAI1의 이상은 원발성 섬모운동장애(primary ciliary dyskinesia)와 연관되며, 축사 다이닌의 무결성 저하가 섬모 운동성 장애 및 그에 따른 발달·호흡기 표현형으로 이어질 수 있음을 시사합니다.

Dynein IC1, axonemal CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 DNAI1 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 DNAI1 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 DNAI1의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 Dynein IC1, axonemal 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 Dynein IC1, axonemal 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 DNAI1 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• Dynein IC1, axonemal 기능에 중요한 DNAI1 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 DNAI1 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• Dynein IC1, axonemal CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 Dynein IC1, axonemal CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 DNAI1 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  Dynein IC1, axonemal HDR 플라스미드 (h) 및 Dynein IC1, axonemal HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 DNAI1 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 DNAI1 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.